Articles

Mecanismes de resistència per a inhibidors de CCR5

El treball descrit en aquest manuscrit té com a objectiu caracteritzar les vies de resistència als inhibidors de CCR5. En un primer pas, vam desenvolupar una prova fenotípica clonal que ens permeti d’una banda identificar el tropisme viral i, d’altra banda, per mesurar la resistència als inhibidors de CCR5. Els virus del tropisme R5 o X4 representant tan sols el 0,4% d’una barreja de poblacions virals són detectables per aquesta prova, demostrant així la seva sensibilitat. A més, gràcies al seu enfocament clonal, aquesta tècnica permet diferenciar els virus de doble tròpicisme de poblacions virals mixtes. Posteriorment, vam estudiar l’impacte de les mutacions a les regions variables de la proteïna GP120 del sobre de VIH-1 sobre la resistència als inhibidors de CCR5. Per fer-ho, hem generat virus resistents a través d’aïllats CC1 / 85 i BAL, en presència de concentracions poc inhibidores de Maraviroc (MVC) i Vicriviroc (VCV). Després d’alguns passatges del virus CC1 / 85 en presència de MVC, alguns van aparèixer a diferents regions del GP120. Posteriorment, hem seleccionat tres mutacions en els dominis variables del GP 120, V169M en V2, L317W V3 i I408T en V4 per construir virus que continguin mutacions senzilles, dobles i triples per avaluar la contribució de les mutacions individuals. O combinat amb el fenotip de resistència . Hem determinat la sensibilitat de cada mutant a MVC i VCV, el percentatge d’infectivitat i el tropisme viral en relació amb el fenotip salvatge. Tots els mutants han conservat el tropisme R5 i han mostrat una disminució de l’infectivitat en relació amb el control. Els nostres resultats han demostrat que els mutants amb mutacions V4 (I408T) han tingut el major impacte en la susceptibilitat al MVC. Finalment, volíem avaluar l’activitat antiviral d’un nou inhibidor CCR5, VCH-286 amb altres inhibidors de CCR5, com ara MVC i VVC, així com les seves interaccions amb medicaments representatius de diferents classes d’ARV antiretrovirals. Clínica per tractar el VIH / SIDA., Per tal de valorar si aquests medicaments es podrien utilitzar en el mateix règim terapèutic. Primerament vam avaluar de forma independent l’activitat antiviral dels tres inhibidors CCR5: VCH-286, MVC i VVC. Posteriorment, hem avaluat les interaccions VCH-286 amb MVC i VVC. Finalment, hem avaluat les interaccions VCH-286 amb altres medicaments antiretrovirals. Aquests estudis han demostrat que VCH-286 és un potent inhibidor CCR5 amb activitat antiviral in vitro de l’ordre nanomolar i les interaccions fàrmacs favorables amb la majoria d’ARV, com la transcriptasa inversa, la proteasa, els inhibidors de la integritat., I la fusió emprada a la clínica per tractar el VIH / SIDA i interaccions que van des de l’antagonisme sinergia amb inhibidors de CCR5. Els nostres resultats mostren que la plasticitat del sobre VIV-1 viral té repercussions sobre la resistència als inhibidors de CCR5, el tropisme i el possible ús d’aquestes molècules en combinació amb altres molècules que pertanyen a la mateixa classe.

El treball descrit a Aquest manuscrit es va posar a caracteritzar les vies de resistència als inhibidors de CCR5. Primer hem desenvolupat un assaig fenotípic per identificar el tropisme viral i mesurar la resistència als inhibidors de CCR5. Aquesta assaig detecta virus tròpics R5 x4 d’or quan representen només un 0,4% en una barreja de poblacions virals, demostrant la seva robustesa i sensibilitat. Basant-se en el seu enfocament clonal, aquest assaig pot diferenciar els virus veritablement tròpics de les poblacions virals mixtes. Després vam estudiar l’impacte de les mutacions en les regions variables de la proteïna de sobre de GP120 del virus del VIH-1 sobre la resistència als inhibidors de CCR5. Per fer-ho, els virus resistents es van generar mitjançant el pas de CC1 / 85 i Bal aïlla en presència de concentracions sub-inhibidores de Maraviroc (MVC) i Vicriviroc (VCV). Després d’alguns passatges del virus CC1 / 85 en presència de MVC, es van identificar algunes mutacions a diferents regions del GP120. Hem seleccionat més tres mutacions en els dominis variables de GP120, V169M en V2, L317W en V3 i I408T en V4 per construir virus individuals, mutacions dobles i triples per avaluar la contribució de les mutacions combinades d’or individuals en el fenotip de resistència a MVC i VCV . Hem determinat la sensibilitat de cada mutant a MVC i VCV, el tropisme i el percentatge d’infectivitat en comparació amb el tipus salvatge. Els nostres resultats van mostrar que les seqüències que porten mutacions en el domini V4 i408T van tenir el major impacte en el sospitós de MVC.Finalment, volem avaluar l’activitat antiviral d’un nou inhibidor CCR5, VCH-286 i la seva interacció amb fàrmacs representatius de diferents classes d’antiretroviral (ARVS), com ara inhibidors de la transcriptasa inversa, inhibidors de la proteasa, inhibidors d’integrases i inhibidors de fusió utilitzats a la clínica Tracteu el VIH / SIDA i altres inhibidors de CCR5, com ara MVC i VVC per avaluar si aquests medicaments es podrien utilitzar junts dins del mateix règim de tractament. Per respondre a aquesta pregunta, hem avaluat per primera vegada l’activitat antiviral dels tres inhibidors CCR5: VCH-286, MVC i VVC. A continuació, vam avaluar les interaccions de VCH -286 amb MVC VVC. Finalment hem avaluat les interaccions de VCH -286 amb altres fàrmacs ARV Aquests estudis van mostrar que VCH-286 és un inhibidor potent de virus R5 amb activitat antiviral a la gamma nanomolar i les interaccions farmacèutiques favorables amb la majoria d’ARV, com la transcriptasa inversa, la proteasa, Interior integras i inhibidors de fusió emprats clínicament per tractar el VIH / SIDA. Les combinacions dels inhibidors de CCR5 tenen interaccions que van des de sinergia fins a l’antagonisme. Els nostres resultats mostren que la plasticitat del sobre viral del VIH-1 afecta la resistència als inhibidors de CCR5, el seu tropisme i la possible combinació d’aquests medicaments.

Deixa un comentari

L'adreça electrònica no es publicarà. Els camps necessaris estan marcats amb *