Articles

Mecanismos de resistencia para inhibidores de CCR5

El trabajo descrito en este manuscrito apunta a caracterizar las vías de resistencia a los inhibidores de la CCR5. En un primer paso, desarrollamos una prueba fenotípica clonal que nos permite, por un lado, identificar el tropismo viral y, por otro lado, medir la resistencia a los inhibidores de la CCR5. Los virus del tropismo R5 o X4 que representan tan poco como 0,4% de una mezcla de poblaciones virales son detectables por esta prueba, lo que demuestra su sensibilidad. Además, gracias a su enfoque clonal, esta técnica hace posible diferenciar los virus del doble tropismo de las poblaciones virales mixtas. Posteriormente, estudiamos el impacto de las mutaciones en las regiones variables de la proteína GP120 de la envolvente del virus del VIH-1 sobre la resistencia a los inhibidores de la CCR5. Para hacer esto, hemos generado virus resistentes a través de Aislatos CC1 / 85 y BAL, en presencia de concentraciones poco inhibitorias de Maraviroc (MVC) y Vicriviroc (VCV). Después de algunos pasajes del virus CC1 / 85 en presencia de MVC, algunos aparecieron en diferentes regiones del GP120. Posteriormente, hemos seleccionado tres mutaciones en los dominios variables del GP 120, V169M en V2, L317W V3 e I408T en V4 para construir virus que contienen mutaciones simples, dobles y triples para evaluar la contribución de las mutaciones individuales. O combinada con el fenotipo de resistencia. . Determinamos la sensibilidad de cada mutante a MVC y VCV, el porcentaje de infectividad y el tropismo viral en relación con el fenotipo salvaje. Todos los mutantes han conservado el tropismo R5 y han mostrado una disminución de la infectividad en relación con el control. Nuestros resultados han demostrado que los mutantes con mutaciones V4 (I408T) han tenido más impacto en la susceptibilidad al MVC. Finalmente, queríamos evaluar la actividad antiviral de un nuevo inhibidor de CCR5, VCH-286 con otros inhibidores de CCR5, como MVC y VVC, así como sus interacciones con medicamentos representativos de diferentes clases de antirretrovirales ARV. Clínica para tratar el VIH / SIDA., Con el fin de evaluar si estos medicamentos podrían usarse en el mismo régimen terapéutico. Primero evaluamos de forma independiente la actividad antiviral de los tres inhibidores de CCR5: VCH-286, MVC y VVC. Posteriormente evaluamos las interacciones VCH-286 con MVC y VVC. Finalmente, evaluamos las interacciones VCH-286 con otros medicamentos antirretrovirales. Estos estudios han demostrado que VCH-286 es un poderoso inhibidor de CCR5 con actividad antiviral in vitro de la orden nanomolar y interacciones favorables de los medicamentos con la mayoría de los ARV, como la transcriptasa inversa, la proteasa, los inhibidores de la integridad., Y la fusión empleada en la clínica para tratar el VIH. / SIDA y interacciones que van desde la sinergia con antagonismo con los inhibidores de CCR5. Nuestros resultados muestran que la plasticidad de la envoltura VIH-1 viral tiene repercusiones en la resistencia a los inhibidores de la CCR5, el tropismo y el posible uso de estas moléculas en combinación con otras moléculas que pertenecen a la misma clase.

El trabajo descrito en Este manuscrito tendido para caracterizar las vías de resistencia a los inhibidores de CCR5. Primero desarrollamos un ensayo fenotípico para identificar el tropismo viral y medir la resistencia a los inhibidores de la CCR5. Este ensayo detecta los virus tropicales R5 Gold X4 cuando representan tan poco como un 0,4% en una mezcla de poblaciones virales, lo que demuestra su robustez y su sensibilidad. Sobre la base de su enfoque clonal, este ensayo puede diferenciar los virus verdaderamente dual-trópicos de las poblaciones virales mixtas. Luego estudiamos el impacto de las mutaciones en las regiones variables de la proteína de la envoltura GP120 del virus del VIH-1 en la resistencia a los inhibidores de CCR5. Para hacer esto, los virus resistentes se generaron mediante el paso de los aislados CC1 / 85 y BAL en presencia de concentraciones sub-inhibitorias de Maraviroc (MVC) y Vicriviroc (VCV). Siguiendo algunos pasajes del virus CC1 / 85 en presencia de MVC, algunas mutaciones se identificaron en diferentes regiones del GP120. Además, seleccionamos tres mutaciones en los dominios variables de GP120, V169M en V2, L317W en V3 e I408T en V4 para construir contener virus individuales, doble y triple mutaciones para evaluar la contribución de mutaciones combinadas de oro individuales en el fenotipo de resistencia a MVC y VCV . Determinamos la sensibilidad de cada mutante a MVC y VCV, el tropismo y el porcentaje de infectividad en comparación con el tipo salvaje. Nuestros resultados mostraron que las secuencias que llevan mutaciones en el dominio V4 I408T, tuvieron más impacto en el sospechoso de MVC.Finalmente, apuntamos a evaluar la actividad antiviral de un nuevo inhibidor de CCR5, VCH-286 y su interacción con los fármacos representativos de diferentes clases de antirretrovirales (ARV), como los inhibidores de la transcriptasa inversa, los inhibidores de la proteasa, los inhibidores de la integrasa y los inhibidores de la fusión utilizados en la clínica a Trate el VIH / SIDA y otros inhibidores de la CCR5, como MVC y VVC para evaluar si estos medicamentos podrían usarse juntos dentro del mismo régimen de tratamiento. Para responder a esta pregunta, primero evaluamos la actividad antiviral de los tres inhibidores de CCR5: VCH-286, MVC y VVC. Luego evaluamos las interacciones de VCH -286 con MVC VVC. Finalmente, evaluamos las interacciones de VCH -286 con otros medicamentos ARV, estos estudios mostraron que VCH-286 es un inhibidor potente de virus R5 con actividad antiviral en la gama nanomolar y las interacciones farmacológicas favorables con la mayoría de los ARV, como la transcriptasa inversa, la proteasa, Inhibidores de la integrasa y fusión empleados clínicamente para tratar el VIH / SIDA. Las combinaciones de los inhibidores de CCR5 tienen interacciones que van desde la sinergia hasta el antagonismo. Nuestros resultados muestran que la plasticidad de la envoltura viral del VIH-1 afecta la resistencia a los inhibidores de la CCR5, su tropismo y la combinación potencial de estos medicamentos.

Deja una respuesta

Tu dirección de correo electrónico no será publicada. Los campos obligatorios están marcados con *