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Meccanismi di resistenza per inibitori CCR5

Il lavoro descritto in questo manoscritto mira a caratterizzare i percorsi di resistenza agli inibitori della CCR5. In un primo passo, abbiamo sviluppato un test fenotipico clonali che ci permettono da un lato di identificare il tropismo virale e dall’altro per misurare la resistenza agli inibitori della CCR5. Virus Tropism R5 o X4 che rappresentano il minimo dello 0,4% di una miscela di popolazioni virali sono rilevabili da questo test, dimostrando così la sua sensibilità. Inoltre, grazie al suo approccio clonale, questa tecnica consente di differenziare i virus del doppio tropismo delle popolazioni virali miscele. Successivamente, abbiamo studiato l’impatto delle mutazioni nelle regioni variabili della proteina GP120 della busta del virus HIV-1 sulla resistenza agli inibitori della CCR5. Per fare ciò, abbiamo generato virus resistenti tramite ISOLATI CC1 / 85 e BAL, in presenza di concentrazioni sottomeribitorie di Maraviroc (MVC) e VICRIVIROC (VCV). Dopo alcuni passaggi dal virus CC1 / 85 in presenza di MVC, alcuni sono apparsi in diverse regioni del GP120. Successivamente, abbiamo selezionato tre mutazioni nei domini variabili del GP 120, V169M in V2, L317W V3 e I408T in V4 per costruire virus contenenti mutazioni semplici, doppie e triple per valutare il contributo delle singole mutazioni. O combinato con il fenotipo di resistenza. . Abbiamo determinato la sensibilità di ogni mutante a MVC e VCV, la percentuale di infettività e il tropismo virale relativo al fenotipo selvatico. Tutti i mutanti hanno conservato il tropismo R5 e hanno mostrato una diminuzione dell’infettività in relazione al controllo. I nostri risultati hanno dimostrato che i mutanti con mutazioni V4 (I408T) hanno avuto il maggior impatto sulla suscettibilità al MVC. Infine, volevamo valutare l’attività antivirale di un nuovo inibitore CCR5, VCH-286 con altri inibitori di CCR5 come MVC e VVC e le sue interazioni con farmaci rappresentativi di diverse classi di antisetrovirali ARV. Clinica per curare l’HIV / AIDS., Al fine di valutare se questi farmaci potrebbero essere utilizzati nello stesso regime terapeutico. Per prima cosa abbiamo valutato in modo indipendente l’attività antivirale dei tre inibitori della CCR5: VCH-286, MVC e VVC. Successivamente abbiamo valutato le interazioni VCH-286 con MVC e VVC. Alla fine abbiamo valutato le interazioni VCH-286 con altri farmaci antiretrovirali. Questi studi hanno dimostrato che VCH-286 è un potente inibitore CCR5 con attività antivirale in vitro dell’Ordine Nanomolare e interazioni farmacologiche favorevoli con la maggior parte degli ARV come trascrittasi inversa, proteasi, inibitori integrali. E fusione impiegata in clinica per curare l’HIV / AIDS e interazioni che vanno dalla sinergia antagonista con inibitori di CCR5. I nostri risultati mostrano che la plasticità della busta virale HIV-1 ha ripercussioni sulla resistenza agli inibitori del CCR5, il tropismo e il possibile uso di queste molecole in combinazione con altre molecole appartenenti alla stessa classe.

Il lavoro descritto in Questo manoscritto ha sposto per caratterizzare i percorsi di resistenza agli inibitori della CCR5. Per prima cosa abbiamo sviluppato un dosaggio fenotipico per identificare il tropismo virale e misurare la resistenza agli inibitori della CCR5. Questo saggio rileva virus R5 tropici oro X4 quando rappresentano il minimo dello 0,4% in una miscela di popolazioni virali, dimostrando la sua robustezza e sensibilità. Sulla base del suo approccio clonale, questo test può differenziare i virus veramente dual-tropicchi da popolazioni virali miscele. Abbiamo quindi studiato l’impatto delle mutazioni nelle regioni variabili della proteina della busta GP120 del virus HIV-1 sulla resistenza agli inibitori della CCR5. Per fare ciò, i virus resistenti sono stati generati dal passaggio degli isolati CC1 / 85 e BAL in presenza di concentrazioni sub-inibitorie di Maraviroc (MVC) e VICRIVIROC (VCV). Seguendo alcuni passaggi del virus CC1 / 85 in presenza di MVC, alcune mutazioni sono state identificate in diverse regioni del GP120. Abbiamo inoltre selezionato tre mutazioni nei domini variabili di GP120, V169M in V2, L317W in V3 e I408T in V4 per costruire virus singoli, doppie e triple mutazioni per valutare il contributo delle singole mutazioni combinate in oro nel fenotipo di resistenza a MVC e VCV . Abbiamo determinato la sensibilità di ciascun mutante a MVC e VCV, il tropismo e la percentuale di infettività rispetto al tipo selvaggio. I nostri risultati hanno mostrato che le sequenze che trasportano mutazioni nel dominio V4 I408T, ha avuto il maggior impatto sul sospetto al MVC.Infine, abbiamo mirato a valutare l’attività antivirale di un nuovo inibitore CCR5, VCH-286 e la sua interazione con farmaci rappresentativi da diverse classi di antiretrovirali (ARV) come inibitori della trascrittasi inversa, inibitori della proteasi, inibitori dell’integrazione e inibitori della fusione utilizzati in clinica a Trattare l’HIV / AIDS e altri inibitori CCR5 come MVC e VVC per valutare se questi farmaci potrebbero essere utilizzati insieme all’interno dello stesso regime di trattamento. Per rispondere a questa domanda, abbiamo valutato per la prima volta l’attività antivirale dei tre inibitori CCR5: VCH-286, MVC e VVC. Abbiamo quindi valutato le interazioni di VCH -286 con MVC VVC. Alla fine abbiamo valutato le interazioni di VCH -286 con altri farmaci ARV Questi studi hanno dimostrato che VCH-286 è un potente inibitore dei virus R5 con attività antivirali presso la gamma Nanomolare e le interazioni farmacologiche favorevoli con la maggior parte degli ARV come Transcriptase, Proteasi, Integratori e inibitori della fusione impiegati clinicamente per curare l’HIV / AIDS. Le combinazioni di inibitori CCR5 hanno interazioni che vanno dalla sinergia all’antagonismo. I nostri risultati mostrano che la plasticità della busta virale dell’HIV-1 influisce sulla resistenza agli inibitori di CCR5, al suo tropismo e alla combinazione potenziale di questi farmaci.

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