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Mecanismos de resistência para inibidores da CCR5

O trabalho descrito neste manuscrito tem como objetivo caracterizar as vias de resistência aos inibidores do CCR5. Em um primeiro passo, desenvolvemos um teste fenotípico clonal que nos permitindo, por um lado, identificar o tropismo viral e, por outro lado, medir a resistência aos inibidores do CCR5. Os vírus do tropismo R5 ou X4 representam apenas 0,4% de uma mistura de populações virais são detectáveis por este teste, demonstrando sua sensibilidade. Além disso, graças à sua abordagem clonal, essa técnica permite diferenciar os vírus do duplo tropulismo de populações virais mistas. Posteriormente, estudamos o impacto das mutações nas regiões variáveis da proteína GP120 do envelope de vírus HIV-1 sobre resistência aos inibidores do CCR5. Para fazer isso, nós geramos vírus resistentes por meio de isolados CC1 / 85 e BAL, na presença de concentrações sub-inibitórias de Maraviroc (MVC) e Vicriviroc (VCV). Após algumas passagens do vírus CC1 / 85 na presença de MVC, alguns apareceram em diferentes regiões do GP120. Posteriormente, selecionamos três mutações nos domínios variáveis do GP 120, V169M no V2, L317W V3 e I408T no V4 para construir vírus contendo mutações simples, duplas e triplas para avaliar a contribuição de mutações individuais. Ou combinado com o fenótipo de resistência . Determinamos a sensibilidade de cada mutante para MVC e VCV, a porcentagem de infectividade e o tropismo viral em relação ao fenótipo selvagem. Todos os mutantes retiveram o tropismo R5 e mostraram uma diminuição na infectividade em relação ao controle. Nossos resultados mostraram que os mutantes com mutações v4 (I408T) tiveram mais impacto na suscetibilidade à MVC. Finalmente, queríamos avaliar a atividade antiviral de um novo inibidor de CCR5, VCH-286 com outros inibidores da CCR5, como MVC e VVC, bem como suas interações com drogas representativas de diferentes classes de anti-retrovirais ARV. Clínica para tratar o HIV / AIDS. A fim de avaliar se essas drogas poderiam ser usadas no mesmo regime terapêutico. Nós primeiro avaliamos de forma independente a atividade antiviral dos três inibidores do CCR5: VCH-286, MVC e VVC. Posteriormente, avaliamos as interações VCH-286 com MVC e VVC. Finalmente avaliamos as interações VCH-286 com outras drogas anti-retrovirais. Esses estudos mostraram que o VCH-286 é um poderoso inibidor de CCR5 com atividade antiviral in vitro da ordem nanomolar e interações fármacas favoráveis com a maioria dos ARVs, como transcriptase reversa, protease, inibidores integrados. E fusão empregada na clínica para tratar o HIV / AIDS e interações que vão desde a sinergia de antagonismo com inibidores da CCR5. Nossos resultados mostram que a plasticidade do envelope viral HIV-1 tem repercussões sobre a resistência aos inibidores do CCR5, o tropismo e o possível uso dessas moléculas em combinação com outras moléculas pertencentes à mesma classe.

o trabalho descrito em Este manuscrito foi colocado para caracterizar os vias de resistência aos inibidores do CCR5. Nós primeiro desenvolvemos um ensaio fenotípico para identificar o tropismo viral e medir a resistência aos inibidores do CCR5. Detecções de ensaio R5 vírus trópicos ouro X4 quando representam apenas 0,4% em uma mistura de populações virais, demonstrando sua robustez e sensibilidade. Com base em sua abordagem clonal, esse ensaio pode diferenciar os vírus verdadeiramente trópicos de populações virais mistas. Em seguida, estudamos o impacto das mutações nas regiões variáveis da proteína de envelope GP120 do vírus HIV-1 sobre resistência aos inibidores do CCR5. Para fazer isso, os vírus resistentes foram gerados por passagem de isolados CC1 / 85 e Bal na presença de concentrações sub-inibidores de Maraviroc (MVC) e Vicriviroc (VCV). Após algumas passagens do vírus CC1 / 85 na presença de MVC, algumas mutações foram identificadas em diferentes regiões do GP120. Nós ainda selecionamos três mutações nos domínios variáveis de GP120, V169M em V2, L317W no V3 e I408T em V4 para construir contendo vírus individuais, mutações duplas e triplas para avaliar a contribuição de mutações individuais combinadas de ouro no fenótipo de resistência ao MVC e VCV . Determinamos a sensibilidade de cada mutante para MVC e VCV, o tropismo e a porcentagem de infectividade em comparação com o tipo selvagem. Nossos resultados mostraram que as seqüências que transportam mutações no domínio V4 I408T, tinham mais impacto em suspeito para MVC.Finalmente, destinamos a avaliar a atividade antiviral de um novo inibidor de CCR5, VCH-286 e sua interação com drogas representativas de diferentes classes de anti-retrovirais (ARVs), tais como inibidores de transcriptase reversa, inibidores de protease, inibidores da integrase e inibidores de fusão utilizados na clínica para Trate o HIV / AIDS e outros inibidores do CCR5, como MVC e VVC para avaliar se essas drogas podem ser usadas em conjunto no mesmo regime de tratamento. Para responder a esta questão, avaliamos pela primeira vez a atividade antiviral dos três inibidores do CCR5: VCH-286, MVC e VVC. Em seguida, avaliamos as interações do VCH -286 com o MVC VVC. Finalmente avaliamos as interações do VCH -286 com outros medicamentos ARV Esses estudos mostraram que VCH-286 é um potente inibidor de vírus R5 com atividade antiviral na faixa nanomolar e interações favoráveis com a maioria dos ARVs, como transcriptase reversa, protease, Inibidores de integrase e fusão empregados clinicamente para tratar o HIV / AIDS. As combinações de inibidores do CCR5 têm interações que vão desde a sinergia ao antagonismo. Nossos resultados mostram que a plasticidade do envelope viral de HIV-1 afeta a resistência aos inibidores do CCR5, seu tropismo e a combinação potencial dessas drogas.

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