Articles

Mecanisme de rezistență pentru inhibitorii CCR5

Lucrarea descrisă în acest manuscris are drept scop caracterizarea căilor de rezistență la inhibitorii CCR5. Într-un prim pas, am dezvoltat un test fenotipic clonal, permițându-ne pe de o parte pentru a identifica tropismul viral și, pe de altă parte, pentru a măsura rezistența la inhibitorii CCR5. Virușii tropismului R5 sau X4 reprezentând doar 0,4% dintr-un amestec de populații virale sunt detectabile prin acest test, demonstrând astfel sensibilitatea acestuia. În plus, datorită abordării sale clonale, această tehnică face posibilă diferențierea virușilor dublu tropism ai populațiilor virale mixte. Ulterior, am studiat impactul mutațiilor în regiunile variabile ale proteinei GP120 a plicului virusului HIV-1 privind rezistența la inhibitorii CCR5. Pentru a face acest lucru, am generat viruși rezistenți prin izolatele CC1 / 85 și BAL, în prezența concentrațiilor sub-inhibitoare ale Maraviroc (MVC) și Vicriviroc (VCV). După unele pasaje din virusul CC1 / 85 în prezența MVC, unii au apărut în diferite regiuni ale GP120. Ulterior, am selectat trei mutații în domeniile variabile ale GP 120, V169M în V2, L317W V3 și I408T în V4 pentru a construi viruși care conțin mutații simple, duble și triple pentru a evalua contribuția mutațiilor individuale. Sau combinate cu fenotipul de rezistență . Am determinat sensibilitatea fiecărui mutant la MVC și VCV, procentul de infecțiozitate și tropismul viral față de fenotipul sălbatic. Toți mutanții au păstrat tropismul R5 și au arătat o scădere a infecțiozității în raport cu controlul. Rezultatele noastre au arătat că mutanții cu mutații V4 (I408T) au avut cel mai mare impact asupra susceptibilității la MVC. În cele din urmă, am vrut să evaluăm activitatea antivirală a unui nou inhibitor CCR5, VCH-286 cu alți inhibitori CCR5 cum ar fi MVC și VVC, precum și interacțiunile cu medicamente reprezentative de diferite clase de antiretrovirale ARV. Clinica pentru tratarea HIV / SIDA., Pentru a evalua dacă aceste medicamente ar putea fi utilizate în același regim terapeutic. Am evaluat mai întâi în mod independent activitatea antivirală a celor trei inhibitori CCR5: VCH-286, MVC și VVC. Ulterior am evaluat interacțiunile VCH-286 cu MVC și VVC. În cele din urmă am evaluat interacțiunile VCH-286 cu alte medicamente antiretrovirale. Aceste studii au arătat că VCH-286 este un inhibitor puternic CCR5 cu activitate antivirală in vitro a ordinii nanomolare și a interacțiunilor favorabile medicamentului cu majoritatea ARV-urilor, cum ar fi transcriptaza inversă, proteaza, inhibitorii integrați. Și fuziunea angajată în clinică pentru a trata HIV / SIDA și interacțiunile variind de la sinergia antagonismului cu inhibitori CCR5. Rezultatele noastre arată că plasticitatea plicului viral HIV-1 are repercusiuni asupra rezistenței la inhibitorii CCR5, tropismul și utilizarea posibilă a acestor molecule în combinație cu alte molecule aparținând aceleiași clase.

Lucrarea descrisă în Acest manuscris a fost așezat pentru a caracteriza căile de rezistență la inhibitorii CCR5. Am dezvoltat mai întâi un test fenotipic pentru a identifica tropismul viral și pentru a măsura rezistența la inhibitorii CCR5. Acest detectat de testare R5 Tropic Virusuri Gold X4 când reprezintă doar 0,4% într-un amestec de populații virale, demonstrând robustețea și sensibilitatea. Pe baza abordării sale clonale, această analiză poate diferenția virușii cu adevărat dual-tropici din populațiile virale mixte. Apoi am studiat impactul mutațiilor în regiunile variabile ale proteinei Plice GP120 ale virusului HIV-1 asupra rezistenței la inhibitorii CCR5. Pentru a face acest lucru, virusurile rezistente au fost generate prin trecerea de Izolate CC1 / 85 și BAL în prezența concentrațiilor sub-inhibitive ale Maraviroc (MVC) și Vicriviroc (VCV). În urma unor pasaje ale virusului CC1 / 85 în prezența MVC, au fost identificate unele mutații în diferite regiuni ale GP120. Am selectat în continuare trei mutații în domeniile variabile ale GP120, V169M în V2, L317W în V3 și I408T în V4 și în V4 pentru a construi conținând viruși unici, mutațiile duble și triple pentru a evalua contribuția mutațiilor individuale de aur în fenotipul rezistenței la MVC și VCV . Am determinat sensibilitatea fiecărui mutant la MVC și VCV, tropismul și procentul de infecțiozitate comparativ cu tipul sălbatic. Rezultatele noastre au arătat că secvențele care transportă mutații în domeniul V4 I408T au avut cel mai mare impact asupra suspectului la MVC.În cele din urmă, ne-am propus să evaluăm activitatea antivirală a unui nou inhibitor CCR5, VCH-286 și interacțiunea acestuia cu medicamentele reprezentative din diferite clase de antiretrovirale (ARV-uri), cum ar fi inhibitori de transcriptază inversă, inhibitori de protează, inhibitori ai integrantelor și inhibitori de fuziune utilizați în clinică Tratați HIV / SIDA și alți inhibitori CCR5 cum ar fi MVC și VVC pentru a evalua dacă aceste medicamente ar putea fi utilizate împreună în același regim de tratament. Pentru a răspunde la această întrebare, am evaluat mai întâi activitatea antivirală a celor trei inhibitori CCR5: VCH-286, MVC și VVC. Apoi am evaluat interacțiunile VCH -286 cu MVC VVC. Am evaluat în cele din urmă interacțiunile din VCH -286 cu alte medicamente ARV Aceste studii au arătat că VCH-286 este un inhibitor puternic al virușilor R5 cu activitate antivirală la intervalul nanomolar și interacțiunile favorabile de medicament cu majoritatea ARV-urilor, cum ar fi transcriptaza inversă, proteaza, proteaza, Inhibitorii integrați și de fuziune angajați clinic pentru a trata HIV / SIDA. Combinațiile inhibitorilor CCR5 au interacțiuni variind de la sinergie la antagonism. Rezultatele noastre arată că plasticitatea plicului viral al HIV-1 afectează rezistența la inhibitorii CCR5, tropismul său și combinația potențială a acestor medicamente.

Lasă un răspuns

Adresa ta de email nu va fi publicată. Câmpurile obligatorii sunt marcate cu *